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如何選擇合適的酶標(biāo)板

更新時間:2018-01-24瀏覽:4524次

   如何選擇合適的酶標(biāo)板?

  酶標(biāo)板種類繁多,大家往往不知道該怎么選擇?如何選擇?今天,小編跟大家一起來學(xué)習(xí)下酶標(biāo)板的選擇技巧!
  一:根據(jù)酶標(biāo)板底部的不同,可以分為平底、U型底、V型底
  平底的折射率低,適于在酶標(biāo)儀檢測;U型底的酶標(biāo)板折射率較高,方便加樣、吸樣、混勻等操作,可以不用放在酶標(biāo)儀上,直接通過目測觀察顏色變化情況,從而判定有無相應(yīng)的免疫反應(yīng)。V底的酶標(biāo)板可以的吸取樣品。
  二:根據(jù)酶標(biāo)板與蛋白和其它分子結(jié)合能力的不同,分為高結(jié)合力、中結(jié)合力和氨基化
  高結(jié)合力:表面經(jīng)處理后,其蛋白結(jié)合能力大大增強(qiáng),可達(dá)300~400ngIgG/cm2,主要結(jié)合的蛋白分子量>10kD。使用該類酶標(biāo)板可提高敏感性,并可相對減少包被蛋白的濃度和用量,不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)??乖蚩贵w包被后,以非離子去污劑無法有效地封閉未結(jié)合蛋白的部位,需使用蛋白作為封閉劑。
  中結(jié)合力:經(jīng)表面疏水鍵被動與蛋白結(jié)合,適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,其蛋白結(jié)合能力為200~300ng IgG/cm2。由于該類酶標(biāo)板所具有的僅與大分子結(jié)合的特性,適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體,可降低潛在的非特異性交叉反應(yīng)。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。
  氨基化:經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標(biāo)板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值,其表面可通過離子鍵與帶負(fù)電荷的小分子結(jié)合。由于其表面的親水特性和可通過其它交聯(lián)劑共價結(jié)合的能力,可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性,一部分蛋白分子無法結(jié)合;此外,其表面需有效地封閉。由于親水和共價的表面特性,使用的封閉液必須能夠與非反應(yīng)性氨基基團(tuán)和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團(tuán)發(fā)生作用。
  三:根據(jù)顏色分為透明、黑色、白色
  透明的是zui常用的,用于zui一般的酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)。相對于透明的的板子,還有用于發(fā)光檢測用的不透明的板子,一般有黑色和白色兩種。黑色的酶標(biāo)板自身會有光吸收,所以它的信號相對于白色的板子要低很多,因此一般用于檢測較強(qiáng)的光,如熒光檢測。而白色的酶標(biāo)板就用于較弱的光檢測,常用于一般的化學(xué)發(fā)光。另外黑色的酶標(biāo)板還可以消弱非特異反應(yīng)帶來的問題。有些客戶會問,用一般的酶標(biāo)板可不可以進(jìn)行發(fā)光檢測,回答是不可以的,因?yàn)橐话銖幕瘜W(xué)發(fā)光反應(yīng)中發(fā)射出的光是各向同性的,也就是說各個方向上同等發(fā)射出來的。如果用透明的板子,光不僅會從垂直方向發(fā)散,還從水平方向發(fā)散出來。很容易的就會通過各個孔之間的間隙和孔壁。這樣的話,光較強(qiáng)時相鄰孔之間的影響就會很大,因此不能用透明的酶標(biāo)板來進(jìn)行化學(xué)發(fā)光實(shí)驗(yàn)。
  當(dāng)然,現(xiàn)在的酶標(biāo)板還有可拆卸和不可拆卸供客戶選擇。

 

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