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層析柱安裝的每一個(gè)步驟都很關(guān)鍵

更新時(shí)間:2016-12-22瀏覽:8642次

 層析柱安裝的每一個(gè)步驟都很關(guān)鍵

層析柱是凝膠層析技術(shù)中的主體,一般用玻璃管或有機(jī)玻璃管。根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動(dòng)相中分配系數(shù)不同,從而分離的一種層析法。層析柱的直徑大小不影響分離度,樣品用量大,可加大柱的直徑,一般制備用凝膠柱,直徑大于2厘米,但在加樣時(shí)應(yīng)將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外, 直徑加大,洗脫液體體積增大,樣品稀釋度大。分離度取決于柱高,為分離不同組分,凝膠柱床必須有適宜的高度,分離度與柱高的平方根相關(guān),但由于軟凝膠柱過高擠壓變形阻塞,一般不超過1米。分族分離時(shí)用短柱,一般凝膠柱長(zhǎng)20-30厘米,柱高與直徑的比較5:1─10:1,凝膠床體積為樣品溶液體積的4-10倍。 分級(jí)分離時(shí)柱高與直徑之線為20:1─100:1,常用凝膠柱有50×25厘米,10×25厘米。層析柱濾板下的死體積應(yīng)盡可能的小,如果支掌濾板下的死體積大,被分離組分之間重新混合的可能性就大,其結(jié)果是影響洗脫峰形,出現(xiàn)拖尾出象,降低分辯力。在分離時(shí),死體積不能超過總床體積的1/1000。
簡(jiǎn)述層析柱的安裝流程:
1、檢測(cè)層析柱的各個(gè)部件,確保干凈、完整,擰上下端堵頭,擰緊膨脹圈,然后將層析柱垂直 固定在鐵架臺(tái)上,將裝柱器安裝在層析柱上端。  
2、往層析柱中加入適量的20%乙醇,打開下端口,重力流,排除下篩網(wǎng)中滯留的氣泡,在液面 低至1-2cm高度時(shí)關(guān)閉層析柱下端出口。
3、用玻璃棒緊靠柱子內(nèi)壁引流,將搖勻的介質(zhì)加入到層析柱中,這可以減少氣泡的產(chǎn)生。迅速 用20%乙醇填滿柱子和裝柱器,裝上裝柱器蓋子,連接到?KTA上。
4、打開層析柱下端,開始以30cm/h流速裝柱,直至柱床界面平穩(wěn),停止裝柱,打開裝柱器蓋子,用虹吸法去除界面上端的液體,去掉裝柱器,然后小心的用20%乙醇封滿 柱子剩余部分。
5、擰緊膨脹圈,繼續(xù)用裝柱流速壓柱,至少保持3個(gè)柱體積,以界面不變?yōu)橹?,在界面處做上記?hào),關(guān)閉泵,并關(guān)閉柱子下端出口,使層析柱上端和泵斷開(轉(zhuǎn)接器上接口是打開的),略擰松 膨脹圈,緩慢向下轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)節(jié)桿,到記號(hào)處停止,然后再擰緊膨脹圈,關(guān)閉上接口。
如需了解更多關(guān)于層析柱的信息,歡迎大家繼續(xù)關(guān)注上海榮泰生化工程有限公司。

 

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